使用HPLCONE® 5C18C( 4.6*250mm ,5µm)色谱柱,参照2020年《中国药典》高效液相色谱法对复方丹参片含量(三七)的测定,检测人参皂苷Rg1、人参皂苷Re,可满足实验要求。
色谱条件
色谱柱HPLCONE® 5C18C( 4.6*250mm ,5µm)
流动相 以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表进行梯度洗脱;
流 速 1 mL/min
柱温 室温
波长 203nm
进样量 20μL
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
系统实用性要求 理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000,人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的分离度应大于1.8。
样品配置
对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品及人参皂苷Re对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1各0.2mg,三七皂苷R1及人参皂苷Re各0.05mg的混合溶液,即得.
供试品溶液的制备 取本品10片,除去包衣,精密称定,研细,取约1g,精密称定,精密加入70%甲醇50ml称定重量,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
色谱谱图和数据
1、供试品
峰号 | 保留时间 | 化合物名称 | 面积 | 高度 | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 分离度 |
1 | 45.984 | 人参皂苷Rg1峰 | 1369135 | 65174 | 116649 | 1.272 | -- |
2 | 47.119 | 人参皂苷Re峰 | 149508 | 8443 | 162411 | 1.227 | 2.257 |
2、对照品
峰号 | 保留时间 | 化合物名称 | 面积 | 高度 | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 分离度 |
1 | 41.778 | 人参皂苷Rg1峰 | 1368828 | 31433 | 23516 | 1.267 | -- |
2 | 43.995 | 人参皂苷Re峰 | 294765 | 9421 | 50300 | 1.304 | 2.366 |
结论 使用HPLCONE® 5C18C( 4.6*250mm ,5µm)色谱柱,参照2020年《中国药典》高效液相色谱法对复方丹参片含量(三七)的测定,能满足实验要求。