使用COSMOSIL 5C18-MS-II ( 4.6*250mm ,5µm)色谱柱,参照2020年《中国药典》高效液相色谱法对复方丹参片含量(三七)的测定,检测人参皂苷Rg1、人参皂苷Re,可满足实验要求。
色谱条件
色谱柱 COSMOSIL 5C18-MS-II ( 4.6*250mm ,5µm)
流动相 以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表进行梯度洗脱;
流速 1 mL/min
柱温 室温
波长 203nm
进样量 20μL
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
系统实用性要求 理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000,人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的分离度应大于1.8。
样品配置
对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品及人参皂苷Re对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1各0.2mg,三七皂苷R1及人参皂苷Re各0.05mg的混合溶液,即得.
供试品溶液的制备 取本品10片,除去包衣,精密称定,研细,取约1g,精密称定,精密加入70%甲醇50ml称定重量,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
色谱谱图和数据
1、供试品
峰号 | 保留时间 | 化合物名称 | 面积 | 高度 | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 分离度 |
1 | 46.860 | 人参皂苷Rg1峰 | 1364462 | 83500 | 182386 | 1.010 | -- |
2 | 47.923 | 人参皂苷Re峰 | 163743 | 10987 | 229276 | 1.113 | 2.533 |
2、对照品
峰号 | 保留时间 | 化合物名称 | 面积 | 高度 | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 分离度 |
1 | 44.516 | 人参皂苷Rg1峰 | 1379100 | 59072 | 83752 | 1.027 | -- |
2 | 45.919 | 人参皂苷Re峰 | 286657 | 14992 | 130014 | 1.018 | 2.496 |
结论 使用COSMOSIL 5C18-MS-II ( 4.6*250mm ,5µm)色谱柱,参照2020年《中国药典》高效液相色谱法对复方丹参片含量(三七)的测定,能满足实验要求。