本品为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根。按性状不同,分别习称“北柴胡”和“南柴胡”。春、秋二季采挖,除去茎叶和泥沙,干燥。
使用COSMOSIL 5C18-MS-II色谱柱,参照《中国药典》高效液相色谱法对柴胡提取物进行含量测定,检测柴胡皂苷a、柴胡皂苷d,可满足实验要求。
对照品溶液的制备 取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷d对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含柴胡皂苷a 0.4mg、柴胡皂苷d 0.5mg的溶液,摇匀,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25ml,密塞,30℃水温超声处理(功率200W,频率40kHz)30分钟,滤过,用甲醇20ml分2次洗涤容器及药渣,洗液与滤液合并,回收溶剂至干。残渣加甲醇溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液20μl与供试品溶液10~20 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
色谱条件:
色谱柱:COSMOSIL 5C18-MS-II (4.6mmI.D*250mm)
流动相: A :乙腈 B:水
浓度. 75%→10%(0-50min) 10%(50-55min)
流速:1ml/min
柱温:25℃
波长: UV 210nm
进样量:20μL
理论板数按柴胡皂苷a峰计算应不低于10000。
色谱谱图:
1、柴胡皂苷对照品:
1:Saikosaponin A(柴胡皂苷A):0.364mg/ml2:Saikosaponin D(柴胡皂苷D):0.544mg/ml
2、柴胡提取物
1:Saikosaponin A(柴胡皂苷A)
2:Saikosaponin D(柴胡皂苷D)
结论:COSMOSIL 5C18-MS-II( 4.6mmI.D*250mm)色谱柱,按照中国药典方法对柴胡提取物进行含量测定,能满足实验要求。