本品为菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥头状花序。9~11月花盛开时分批采收,阴干或焙干,或熏、蒸后晒干。药材按产地和加工方法不同,分为“亳菊”、“滁菊”、“贡菊”、“杭菊”、“怀菊”。
使用COSMOSIL 5C18-MS-II色谱柱,参照《中国药典》高效液相色谱法对菊花提取物进行含量测定,检测绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸,可满足实验要求。
对照品溶液的制备 取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、 3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加70%甲醇制成每1ml含绿原酸35μg,木犀草苷25μg,3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸80μg的混合溶液,即得(10℃以下保存)。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过一号筛)约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率300W,频率45kHz)40分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
色谱条件:
色谱柱:COSMOSIL 5C18-MS-II (4.6mmI.D*250mm,5μm)
流动相: A;乙腈
B;0.1%H3PO4
B conc.90→82%(0-11min) 82→80%(11-30min)
80%(30-40min)
流 速:1 mL/min
柱 温:25 ℃
波 长:UV 348 nm
进样量:5μL
理论板数按3, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸峰计算应不低于8000。
色谱谱图:
一、对照品
1:Chlorogenic acid(绿原酸):39.8μg/ml
2:Luteoloside(木犀草苷):23.4μg/ml
3:3,5-O- pair of Coffee - formyl acid(3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸):82.6μg/ml
二、菊花提取物
1:Chlorogenic acid(绿原酸)
2:Luteoloside(木犀草苷)
3:3,5-O- pair of Coffee - formyl acid(3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸)
结论:COSMOSIL 5C18-MS-II( 4.6mmI.D*250mm)色谱柱,按照中国药典方法对菊花提取物进行含量测定,能满足实验要求。