使用HPLCONE® 5C18D ( 4.6*250mm ，5µm)色谱柱，参照《中国药典》（2020年版）高效液相色谱法对附子的含量测定，检测苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱，可满足实验要求。
对照品溶液的制备 取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加异丙醇-二氯甲烷（1:1）混合溶液制成每1ml各含10μg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液3ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液50ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz，水温在25℃以下）30分钟，放冷，再称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-二氯甲烷（1:1）混合溶液3ml溶解，滤过，取续滤液，即得。
色谱条件
色谱柱 HPLCONE® 5C18D ( 4.6*250mm ，5µm)
流动相 乙腈-四氢呋喃（25:15）为流动相A，以0.1mol/L醋酸铵溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱
流 速 1 mL/min
柱 温 室温
波 长 235nm
进样量 10μL
色谱谱图
1、供试品
2、对照品
结论：使用HPLCONE® 5C18D( 4.6*250mm ，5µm)色谱柱，参照《中国药典》（2020年版）高效液相色谱法对附子的含量测定，可满足实验要求。