有时会在抗体药物中添加少量表面活性剂以防止IgG聚集和吸附,表面活性剂的浓度控制对于质量管理非常重要。以下是使用聚合物基质反相色谱柱ODP2 HP-4D,不进行前处理,在IgG存在下使用蒸发光散射检测器(ELSD)分析泊洛沙姆188的应用实例。在碱性条件下,IgG不会在色谱柱中保留,随着保留体积一起被色谱柱洗脱,泊洛沙姆188根据反相模式被色谱柱保留。因此,无需进行除蛋白预处理即可对IgG和泊洛沙姆188进行分离。当使用峰面积的对数图创建校正曲线时,在10至100 μg/mL的范围内可获得高线性。 在样品浓度为50 μg/mL时的加标回收率也高达102 %。使用本实验条件,仅稀释抗体药物,即能通过HPLC方法快速而有效地分析泊洛沙姆188。
Column : Shodex ODP2 HP-4D (4.6 mm I.D. x 150 mm)
Eluent : (A) 0.1 % NH3 aq./(B) CH3CN
Low pressure linear gradient;
(B %) 20 % to 80 % (0 to 5 min), 80 % (5 to 6 min),
80 to 20 % (6 to 6.01 min), 20 % (6.01 to 10 min)
Flow rate : 1.0 mL/min
Detector : ELSD
Column temp. : 40 ℃