有时在抗体药物中加入少量表面活性剂防止IgG的聚集和吸附,并且表面活性剂的浓度控制对于质量控制非常重要。以下是使用聚合物基质反相色谱柱ODP2 HP-4D,配合蒸发光(ELS)检测器,不进行前处理,分析市售抗体药物中聚山梨醇脂 80(产品名:吐温 80)的应用实例。碱性条件下IgG无法被色谱柱保留直接被洗脱,吐温 80由于反相模式的作用被色谱柱保留。所以,可以不进行前处理(除蛋白),完全分离吐温80及IgG。取4.3 ~ 5.5分钟的峰面积做标准曲线(对数-对数图),在10 ~ 100 μg/mL的浓度范围可以得到直线性良好的标准曲线。50 μg/mL浓度添加回收率能达到93%。使用本方法只需稀释抗体药物即可进行HPLC分析,可以迅速高效的分析吐温80。
Column : Shodex ODP2 HP-4D (4.6 mm I.D. x 150 mm)
Eluent : (A) 0.1 % NH3 aq./(B) CH3CN
Low pressure linear gradient;
(B %) 20 % to 80 % (0 to 5 min), 80 % (5 to 6 min),
80 to 20 % (6 to 6.01 min), 20 % (6.01 to 10 min)
Flow rate : 1.0 mL/min
Detector : ELS
Column temp. : 40 ℃