作为外泌体(EV)的分析实例，细胞培养上清液的EV制备过程，使用聚合物基质水溶性SEC(GFC)色谱柱OHpak SB-806 HQ和各种检测器配合进行分析。UV 280 nm对于所有培养的不纯物质，荧光Ex 280 nm / Em 348 nm主要对于蛋白质(Trp残基做标准)，MALS光散射检测器(LS)对于纳米粒子具有高灵敏度。另外MALS还能推得目标的RMS(惯性旋转半径)值。8分钟左右可见EV作为目标成分和培养来的不纯物质的分离。UV和荧光检测器可以把握纯化过程的进展及效果，但是其对于大部分为脂质膜构成，含有微量蛋白质和核酸的EV灵敏度很低，特别是纯化初期，LS是更为有效的EV追迹手段。 SB-806 HQ拥有足够的孔径来容纳和分离EV的纳米级粒子，是适用于生物制品的高性能水溶性SEC(GFC)色谱柱。和多种检测器配合，可以用于复杂的生物纳米靶制备过程的综合分析。
EV制备方法
(1) 浓缩步骤： 市售离心超滤膜 100 kDa (40倍浓缩)
(2) 亲和步骤： 市售亲和纯化试剂盒 (10倍浓缩相当)样品制备由昭和电工材料株式会
Sample :1. Cell culture supernatant 50 μL inj.2. Concentrate 50 μL inj.3. Crude product 15 μL inj.
Column : Shodex OHpak SB-806 HQ (8.0 mm I.D. x 300 mm)
Eluent : PBS (-)
Flow rate : 1.0 mL/min
Detector : UV (280 nm)
Fluorescence (Ex.280 nm, Em.348 nm)
MALS (DAWN8+ produced by Wyatt Technology Corp.)
Column temp. : 25 ℃