流动相pH值对分析的影响(DEAE-825)

2023-07-10 6

色谱柱DEAE-825 ;Conalbumin白蛋白;Ovalbumin卵清蛋白;Transferrin转铁蛋白;Trypsin inhibitor胰蛋白酶抑制剂;

缓冲溶剂酸性时,四种蛋白质可以用 IEC DEAE-825(弱阴离子交换色谱柱)很好的分离。相反,流动相是碱性时,蛋白质分离 很差。提高PH值,四个峰倾向于汇集成单个峰。原因是当PH值高时,填料上的离子交换基团不易变成游离态。
  Sample : 100 μL
1. Conalbumin 0.1 %
2. Transferrin 0.2 %
3. Ovalbumin 0.2 %
4. Trypsin inhibitor 0.2 %  
Column : Shodex IEC DEAE-825 (8.0 mm I.D. x 75 mm) Eluent : (A); 20 mM Piperazine-HCl buffer (pH6.0) 20 mM Bis-Tris-HCl buffer (pH7.0) 20 mM Tris-HCl buffer (pH8.0) 20 mM Ethanolamine-HCl buffer (pH9.0) 20 mM 1,3-Diaminopropane-HCl buffer (pH10.0) (B); (A) + 0.5 M NaCl Linear gradient; 0 min to 20 min, (A) to (B) Flow rate : 1.0 mL/min Detector : UV (280 nm) Column temp. : 25 ℃
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