使用蛋白质分析用色谱柱PROTEIN LW-803追踪人单克隆IgG通过木瓜蛋白酶消化过程。由木瓜蛋白酶分解IgG,除了分解成构成IgG的经典片段Fc和Fab,可能还会出现期间的过渡分解中间体。LW-803可以对主成分IgG及其分解产物以及中间体都能很好的分离,所以对IgG的分解以及对分解产物片段的生成过程观察非常合适。LW-803提高了IgG周边分子量领域的分离能力,不仅仅对于抗体生产中高分子侧的不纯物质凝集体(寡聚体),对于低分子侧的分析、片段的管理也能发挥作用。
木瓜蛋白酶的消化过程)
1. 人单克隆IgG 3 mg 使用溶剂 500 µL溶解 (6 mg/mL)
2. 木瓜蛋白酶1 mg 使用溶剂1mL溶解 (1 mg/mL)
3. 1、2的溶液过0.2 µm滤膜
4. 各溶液等量混合(IgG 3 mg/mL、木瓜蛋白酶 0.5 mg/mL)
5. 25 ℃保温6. 经时进样、HPLC分析
Sample : 10 μLHumanized monoclonal IgG
1. Aggregates of IgG
2. Dimer of IgG
3. Monomer of IgG
4, 5, 6. Fragments of IgGfrom papain digestion
7. Citric acid
8. Papain
Column : Shodex PROTEIN LW-803 (8.0 mm I.D. x 300 mm)
Eluent : 0.1 M Sodium phosphate buffer (pH7.0) + 0.3 M NaCl
Flow rate : 1.0 mL/min
Detector : UV (280 nm)
Column temp. : 25 ℃